限制性内切酶如何切割?
这一过程需借助两种酶:限制性核酸内切酶和DNA连接酶。
限制性核酸内切酶是可以识别特定的脱氧核苷酸序列,并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶,简称限制酶。
DNA连接酶利用NAD或ATP中的能量催化两个核酸链之间形成磷酸二酯键。反应过程可分三步:
(1)NAD+或ATP将其腺苷酰基转移到DNA连接酶的一个赖氨酸残基的ε─氨基上形成共价的酶-腺苷酸中间物,同时释放出烟酰胺单核苷酸(NMN)或焦磷酸。
(2)将酶-腺苷酸中间物上的腺苷酰基再转移到DNA的5'-磷酸基端,形成一个焦磷酰衍生物,即DNA-腺苷酸;
(3)这个被激活的5'-磷酰基端可以和DNA的3'-OH端反应合成磷酸二酯键,同时释放出AMP。
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